学术研究 ——Ｊ中外食品 ｝。 ｆ— ———Ｔ业 —————一 Ｎ一乙酰一 —Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的研究现状 成娟歌 王森 （１．浙江万里学院浙江宁波３１５１００；２．上海财经大学上海２０００８２） 摘要：Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶（Ｎ～Ａｃｅｔｙｌ—Ｂ—Ｄ—ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ，ＮＡＧａｓｅ，ＥＣ ３，２ １．５２）是水解酶中的一种， 因其在几丁质降解过程中的特殊作用，引起国内外学者对其进行多方面研究，包括酶分离纯化系统的建立、生物学性质、克隆测 序等相关研究。文章从动物、植物和微生物三方面介绍了国内外关于ＮＡＧａｓｅ的研究现状。微生物ＮＡＧａｓｅ与真菌细胞壁的形成有 关，有利于农业上生物控制致病真菌的研究；动物ＮＡＧａｓｅ是糖蛋白和粘多糖彻底降解的关键酶，在甲克类动物几丁质和可降解 聚合材料的开发方面有较高的利用价值；植物ＮＡＧａｓｅ研究较少；）Ｌ）］＇ＮＡＧａｓｅ也存在于人体中，对某些疾病的诊疗具有重要意义。 关键词：Ｎ～乙酰一Ｂ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶几丁质代谢酶学性质 中图分类号：５５６＋．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—５３３６（２０１４）１４—００６８—０３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎ—Ａｃｅｔｙｌ—Ｄ—Ｄ～ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ（ＮＡＧａｓｅ，ＥＣ ３ ２．１．５２）．ｉｓ ｏｎｅ ｏｆｔｈｅ ｃｈｉｔｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ，ＮＡＧａｓｅ ｉｎ ｃｈｉｔｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｓｕｇａｒ ｂａｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｓｐｅｃｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｃａｎｓｅ ｔｈｅ ｆｏｒｅｉｇｎ ａｎｄ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｉｔｓ ｖａｒｉｏｕｓ ａｓｐｅｃｔｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ，ｂａｓｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｃｌｏｎｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ＳＯ ｏｎ．Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ ａｓｐｅｃｔｓ ａｓ ａｎｉｍａｌｓ，ｐｌａｎｔｓ，ａｎｄ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｒｍ ａｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｄ ｆｏｒｅｉｇｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｔａｔｕｓ ａｂｏｕｔ ＮＡＧａｓｅ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＮＡＧａｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｃｅｌｌ ｗａｌｌｓ ｏｆｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｓｈｅｌｌ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｇｄｃｕｌｔｕｒｅ；ＮＡＧａｓｅ ａｎｉｍａｌｓ ｉｓ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅ￣ｙｍｅ ｏｆ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍｕｃｏｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ， ｃｈｉｔｉｎ ｉｎｊａｃｋｅｔ ｔｙｐｅ ｏｆａｎｉｍａｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｈａｖｅ ｈｉｇｈｅｒ ｕｓｅ ｖａｌｕｅ；ＮＡＧａｓｅ ｐｌａｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｓ ｌｅｓｓ；ＮＡＧａｓｅ ａｒｅ ａｌｓｏ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｂｏｄｙ，ｉｓ ｏｆ ｒｅａｔｇ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｍｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｎ—Ａｃｅｔｙｌ～Ｂ—Ｄ—ｇｌｕｃｏｓａｒｎｉｎｉｄａｓｅ Ｃｈｉｔｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ 几丁质（ｃｈｉｔｉｎ）又可以称作甲壳素，甲壳质等，是由 几千个乙酰葡萄糖胺残基通过ｐ一１，４糖甙链直线连 接成的聚合（图１－１）［１ｌ，因此又名（１，４）一２一乙酰氨基－－２－－ 脱氧一Ｄ－Ｄ一葡萄糖ｉｔ２】。其在自然界中的分布仅次于植 物纤维，是目前地球上的第二大生物资源，主要分布 酶，正是几丁质降解酶系中的一种，对于南极磷虾几 丁质的开发有很大的应用价值，已被广泛用于人类保 健及医疗抗菌、环境保护、化学化工及生物工程等领 域，目前国外已就几丁质的降解及生物学转化开展一 系列研究，国内相关研究报道较少。 在低等植物，节肢动物、以及昆虫的外壳、软体动物（如 鱿鱼、乌贼）的外壳等，其每年的生物合成量超过百亿 吨，因此十分具有研究价值＿３】。 多年以来，几丁质的开发一直是研究的热点，研究 发现几丁质本身不能被利用，但他的降解产物有广泛 的用途，几丁质降解后产生的几丁寡糖类生物活性物 质，是几丁质工业中的高附加值产品，已被广泛用于 人类保健及医疗抗菌［４】。而Ｎ一乙酰一ｐ～Ｄ一氨基葡萄糖 １ Ｎ一乙酰一１３一Ｄ氨基葡萄糖苷酶概述 Ｎ一乙酰一 －Ｄ－氨基葡萄糖苷酶（Ｎ—Ａｃｅｔｙｌ—ｆ５一 Ｄ－ｇｌｕｃ０ｓａｍｉｎｉｄａｓｅ ＮＡＧａｓｅ，Ｅ Ｃ ３．２．１．５２）是酸性水 解酶中的一种，在几丁质降解过程中起关键作用，其 在生物体中主要分布在动物内脏中，其可将几丁质代 谢过程中产生的寡糖水解成单糖［５］。此外，该酶广泛存 在于各种组织器官、体液中。其测定方法有比色法和 荧光光度法，甲壳动物体内营养代谢以及周期性脱壳 也有该酶的参与，因此，对该酶的研究，有助于促进甲 壳动物周期性脱壳的生长研究【６Ｉ。该酶的研究可以提 高触杀虫剂的效果，将该与一些生物农药联用将有助 于药剂对害虫几丁质表皮的渗透，从而提高触杀农业 害虫的效果 ７ｌ。 ２ Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ氨基葡萄糖苷酶的分子生物学研 究现状 图１—１几丁质的结构（Ｖａａｊｃ—Ｋｏｌｓｔａｄ，Ｇ．ｅｌ ａｌ，２０１ ０） Ｆｉｇ．１－１．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃｈｉｔｉｎ ２．１酶的分离纯化及性质研究概况 Ｎ～乙酰一ｐ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶来源十分丰富， 目前已有报道较多的是动物、和微生物中均可分离纯 收稿日期：２０１４－０６—０５ 基金项目：宁波市合作项目“南极磷虾系列食品的开发”（２０１２Ｄ１００１２）。 作者简介：成娟歌（１９９０－－），女，硕士研究生，研究方向水生生物种质工程与海洋牧场。 通讯作者：王森。 ６８ 中外食品工业５ｉｎ口一ｆｏｒｅｉｇｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ＿＿Ｉ中外食品 十１＿＿ 学术研究 化得到。微生物Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶是目 Ｎ一乙酰一ｐ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶主要存在于昆虫和甲 前研究最多，做深入的，动物中主要集中在甲壳类动 壳动物的内脏以及性腺中［２６－２７１。 物的研究，植物中从１ ９９４年有学者第一次研究，到目 有研究者已从烟草天蛾内脏中纯化出两种几丁质 前研究你依然很少＿８１。动物中该酶的分离纯化主要采用 水解酶：外切几丁质酶和Ｎ一乙酰一ｐ－Ｄ－氨基葡萄糖 凝胶柱，ＤＥＡＥ离子交换柱层析分离纯化等；微生物中 苷酶；对纯化的烟草天蛾ＮＡ—Ｇａｓｅ酶的研究表明，在蜕 真菌（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｓ￣ｍｌｌｕｍ）中主要利用ＨｉＴｒａｔ￣阴离 皮液中外切几丁质酶和酶协同作用的效率是单ＮＡ— 子交换柱及ｐｈｅｎｙｌ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ疏水柱层析分离纯化出两 Ｇａｓｅ酶作用的六倍，而这种协同增效作用的速度取决 种同型二聚体Ｎ一乙酰一Ｄ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶 ； 于蜕皮液中两种酶的比＿２ 。 从嗜高温菌（Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ ｃｈｉｔｏｎｏｐｈａｇｕｓ）中利用ｂｕ— ５植物中Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的研究 ｔｙｌ—ＴＳＫ—ＮＰＲ疏水柱及Ｍｏｎｏ Ｑ离子交换柱层析分离 单亚基Ｎ一乙酰一ｐ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶［１们等。 ２．２酶的抑制失活研究性研究概况 Ｎ一乙酰～Ｄ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶的抑制和失活研 究，可影响其生理功能，也可抑制某些细菌、真菌和昆 虫的生长发育，在相关研究中也有报道过。相关研究 主要做了金属离子Ｈｇｎ，Ｃｕ ，Ｆｅ ，和Ｚｎ抖，变性剂盐 酸胍、尿素等对Ｎ一乙酰一Ｂ－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶活性、 结构等的影响。表明Ｈｇ２＋，Ｃｕ外，Ｆｅ２＋，和Ｚｎ 等金属离 子抑制剂对Ｎ一乙酰一０－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶，均有不 同年程度的抑制作用，重金属离子抑制性更强，其中 Ｚｎ Ｃｕ２＋，为可逆性非竞争抑制，而Ｈｇ 等金属离子多 为不可逆性抑制…一１２１。 ３微生物中Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶研究 概况 关于微生物Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶目 前研究最多，最有价值的就是其与真菌细胞壁和细菌 多糖外壳的形成相关，对于农业上生物控制致病真菌 有重要作用［１３ｌ。对此多为学者做了相关研究，通过对不 同对微生物Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶活力 的研究，发现，在大部分真菌中该酶最适ｐ Ｈ值介于 ４．０～５．５之间，等电点偏酸『１ １；而细菌来源的酶的等电 点偏酸偏碱的都有，研究者们猜想这可能与其含有较 多的谷氨酸和天冬氨酸等有关［】 。不同来源的细菌Ｎ一 乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的最适温度差异较大， 真菌Ｎ一乙酰一Ｄ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的最适温度大约 在５０Ｅ［１６１。 目前研究报道的微生物Ｎ一乙酰一Ｄ—Ｄ一氨基葡 萄糖苷酶的分离纯化大多采用盐析、透析、疏水柱、离 子交换柱、凝胶柱等多步层析纯化步骤［１７１。谭玉龙做了 Ｎ一乙酰氨基葡萄糖苷酶Ｎａｇ １对于生物膜结构的作 用，发现可有效抑制生物被膜的形成，同时也可清除 生物被膜结构并有效的恢复了抗生素的效果＿１引。 ４动物中Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的研究概 况 关于动物，国内外研究较多的主要集中在烟草天 蛾、家蚕、蜘蛛、中国螯蟹、山麻鸭、猪、虾等物种，研究 表明两栖类动物、鸟类及昆虫等都能产生几丁质酶， 而另外一些动物如兔子和龟则不能产生任何几丁质 酶，仅含有微量的几丁质二糖酶［１９－２１】。一些研究表明动 物几丁质酶也属于内切酶体系，可将几丁质水解成二 糖或三糖，动物几丁质酶主要分布于消化液、腺体、胃 和肠粘膜 １。其中虾类主要研究的是南美白对虾，而对 于南极磷虾中有关该酶的报道目前还没有。研究表明 概况 到目前为止，关于植物几丁质酶系的报道较少， ２００３年Ｏｉｋａｗａ等人报道了从玉米幼苗中提取ｐ—Ｎ一 乙酰氨基己糖苷酶，通过凝胶电泳测得该酶分子量为 ７０ ｋＤａ，单亚基［２６－２８］；最适ｐＨ为４．５，最适温度为５５℃， 等电点为６．７５，同做了Ａｇ Ｈｇ 等金属离子对该酶抑 制作用的研究，表明Ａｇ Ｈｇ 是不可逆非竞争性抑制 ］ｆｌｉｔ 一川。 追溯更早发现史益敏等研究者在１ ９ ９ ４年也做了 相关研究Ｂ”，从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ） 的番茄叶胞外蛋白提取液中分离纯化得分子量为 １４５ｋＤａ的同型二聚体ｐ—Ｎ一乙酰氨基己糖苷酶，该酶 同时具有Ｎ一乙酰一Ｄ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶和Ｎ一乙 酰一ｐ－Ｄ一氨基半乳糖糖苷酶活力，最适ｐＨ在４．８～ ５．０之间，最适温度在４４～４７℃之间 卜 引。进一步做 了，Ｎ一乙酰葡萄糖和Ｎ一乙酰半乳糖等抑制剂对该活 性、结构等的影响实验，表明Ｎ一乙酰葡萄糖和Ｎ一乙 酰半乳糖是酶的竞争性抑制剂，Ａｇ 和Ｈｇ 是酶活性 的不可逆抑制剂【３ －３ １。 ６总结和展望 作为几丁质生物降解的主要酶类，Ｎ一乙酰一ｐ～ Ｄ一氨基葡萄糖苷酶受到诸多生命学科的重视，并开展 了大量的研究工作，目前已经建立了一整套较为完善 的酶学体系和研究方法，对Ｎ一乙酰一ｐ－Ｄ－氨基葡萄 糖苷酶的理化性质、生物结构例如Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨 基葡萄糖苷酶蛋白的核苷酸序列、一级结构和高级结 构以及作用机理等许多方面进行了深入系统的研究。 普遍的观点认为来源于细菌的Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡 萄糖苷酶其主要功能是将几丁质分解利用作为营养 源；近年来随着分子生物技术的高速发展，大量的不 同来源的Ｎ一乙酰一ｐ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶基因被克 隆，并作了细致的序列分析。 近年来，我国的海产品养殖加工工业迅猛发展，尤 其是南极磷虾的副产品的开发，是目前生物资源开 发的热点。由于对于南极磷虾的加工利用上尚处于初 级阶段，在加工中产生大量的废弃物，这些废弃物中 ５０％都是几丁质。所以对于南极磷虾几丁质的开发研 究目前是世界上各个国家都在研究的课题，对于该酶 的研究有助于我们对于几丁质催化降解机理的研究， 为几丁质降解提供理论基础。 致谢 感谢为本文提供帮助的所有老师和同学们，谢谢 你们辛勤的付出，感谢本人所采用文献的作者们，因 为有你们研究的基础，才有了今天这篇文章，你们是 中外食品工业５ １口一ｆｏｒ￣ｇｎ Ｆ叩ｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ６９ 学术研究 最大的付出者，谢谢你们 参考文献 ［１］张宇婷．来源于维式气单胞菌Ｂ５６５的两个几丁质降解 酶基因的高效表达、性质研究及水产养殖应用［Ｄ］．中国 农科院，２０１ ２． ［２］张继平．锯缘青蟹Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的 性质及活力研究［Ｄ］．厦门大学，２０１１． ［３］陈少波。吴根福．几丁质酶研究进展［Ｊ］．科技通报，２００４， 科学，２００８，４ １（９）：２８４３－２８４９． ［２２］０ＩＫＡｗＡ Ａ，ＩＴＯＨ Ｅ，ＩＳＨＩＨＡＲＡ Ａ，ＩＷＡＭＵＲＡ Ｈ．Ｐｕｒｉｆｉｃａ— ｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ—Ｎ—ａｃｅｔｙ］ｈｅｘ０ｓａｍ１ｎ１ｄ ａｓｅ ｆｒｏｍ Ｍａｉｚｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏ１．２００３。１ ６０：９９１— ９９９． ［２３］魏晓倩．凡纳滨对虾壳膜Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄 糖苷酶性质及活力的研究［Ｄ］．厦门大学，２００６． ［２４］石艳．菜青虫Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的性 质研究［Ｄ］．厦门大学，２００６． ２０：２５８－２６２． ［２５］王吉桥．南美白对虾生物学研究与养殖［Ｈ］．北京：海洋 ［４］蓝海燕，田颖川，王长海，等．表达Ｂ一１，３一葡聚糖酶及几 出版社，２００３． 丁质酶基因的转基因烟草及其抗真菌病的研究［Ｌ］］．遗传学 报。２０００。２７：７０－７７． ［５］张莉。杨土凤胨晓梅，等．气单胞菌几丁质酶的产酶条件 优化研究［Ｌ］］．安徽农业科学，２００７，３５（１ ７）：５０３５－５０３７． ［６］王军．棉铃虫Ｎ一乙酰一Ｂ＿Ｄ一氨基葡萄糖苷酶活力 的研究［Ｄ］．厦门大学，２００６． ［７］龚敏．南美白对虾Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶活 力及动力学研究［Ｄ］．厦门大学，２００６． ［８］杨学敏．效应物对锯缘青蟹Ｎ一乙酰一ｐ－Ｄ一氨基葡萄 糖苷酶的抑制作用研究［Ｄ］．厦门大学。２００６． ［９］李昕，王海燕，张义正．利用细菌血红蛋白提高大肠杆菌 基因工程菌几丁质酶基因的表达［Ｊ］．四川大学学报，２００３， ４０（４）：７８７—７９１． ［１０］李华钟，王树英，森本兼司等．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｒａｐｕｔｒｉ ｆｉｃｕｍＭ一２１￥一Ｎ一乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化与 性质［Ｊ］．无锡轻工大学学报，２００３，２２（３）；０３一Ｏ５． ［１ １］ＫＩＭＵＲＡ Ｙ，ＴＯＫＵＤＡ Ｔ．ＯＨＮＯ Ａ。ＴＡＮＡＫＡ Ｈ。ＩＳＨＩＧＵＲＯ Ｙ． Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏ—ｐ—Ｎ—ａｃｅｔｙ１ｇ１ｕｃｏｓａｍ１ ｎｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｔｏｍａｔｏ ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｓｅｅｄｓ：ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｏｒｉｇｉｎ ｅｎｄｏｇｌｙｃ ｏｓｊｄａｓｅ［Ｊ］Ｂ１０ｃｈ１ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９８。１３８１：２７－３６． ［１２］杨丽，姜亦文．甲壳素物降解的现状［Ｊ］．青岛化工学院 学报，２０００，２ １（４）：３０１－３０４． ［１３］彭辉银，李星．中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基 因的定位与克隆［Ｊ］．中国病毒学。１９９８，１３（２）：１３９—１４３． ［１４］邱立友．微生物几丁质酶与害虫防治［Ｊ］．河南农业大 学学报，１９９５，２９（２）：１８４－１９１． ［１ ５］吴家和。张献龙，罗晓丽。等．转几丁质酶和葡聚糖酶基 因棉花的获得及其对黄萎病的抗性［Ｊ］．遗传学报，２００４。 ３ｌ（２）：１ ８３－１ ８８． ［１６］杨文博，冯波．链霉菌ＳＯ１菌株几丁质酶的纯化及性质 ［Ｌ］］．微生物通报，１９９７，２４（２）：８４—８７． ［１ ７］黄小红。陈清西，尤民生，等．棉铃虫Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨 基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质［Ｊ］．昆虫学报，２００５， ４８（４）：０４５４—６２９６． ［１８］陈三凤，李季伦．几丁质酶研究历史和发展前景［Ｊ］．微 生物学通，１９９３．２０（３）：１５６－１６０． ［１９］陈少波。吴根福．几丁质酶研究进展 ］．科技通报，２００４， ２０（３）：２５８—２６２． ［２０］史益敏。颜季琼，费雪南，等．番茄叶片胞外Ｂ－Ｎ一乙酰 氨基己糖苷酶的部分性质研究［Ｊ］．植物学报，１９９４，３６（１１）： ８６４——８７０． ［２１］黄小红，罗忠宝，李明伟，等．猪精液碱性Ｎ一乙酰一Ｂ— Ｄ一氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究［Ｊ］．中国农业 ７０ 中外食品工业ＳＩｎｏ—ｆｏｒｄＢｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ［２６］王荫长．昆虫生物化学［Ｈ］．北京：中国农业出版社，２００１． ［２７］ＳＣＩＧＥＬＯＶＡ Ｍ，ＣＲＯＵＴ Ｄ Ｈ Ｇ．Ｍｉｃｒｏｂ１ａ１ Ｂ—Ｎ— ａｃｅｔｙ］ｈｅｘＯｓａｍ１ｎｊｄａＳｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｂ１ＯｔｅｃｈｎＯ］Ｏｑ１ｃａ］ａｐ－ ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏ１．１９９９，２５：３—１４． ［２８］ＣＩＦＡＬＩ ＡＰ，Ｆｉｌｈｏ ＢＰ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌ ｃｈａｒ－ ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＮ－ａｃｅｔｙｌ－Ｂ—Ｄ－ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ＴｒｔＥｒ１ｃｈｏｍＯｎａｓ ｆｏｅｔｕｓ［Ｊ］．Ｐａｒａｓｉｔｏ１．Ｒｅｓ．，１９９９，８５：２５６－２６２． ［２９］杜鹃．凡纳滨对虾Ｎ一乙酰一Ｂ—Ｄ一氨基葡萄糖苷酶 的活力的研究［Ｄ］．厦门大学，２００８． ［３０］ＤＯＮＧ Ｄ Ｌ。ＨＡＲＴ Ｇ Ｗ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒ１ｚａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｎ—ａｃｅｔｙｌ—ｂｅｔａ—Ｄ－ｇｌｕｃｏｓａｍ１ｎｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｒａｔ ｓｐｌｅｅｎ ｃｙｔｏｓｏｌ［Ｌ］］．Ｌ］Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１ ９９４，２６９（３０）： １９３２１－１９３３０． ［３１］ＤＲＯＢＡ Ｂ，ＤＲＯＢＡ Ｍ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｍｓ ｏｆ ａｃｉｄ ｂｅｔａ－Ｎ— ａｃｅｔｙ］一Ｄ—ｇ］ｕｃＯｓａｍ１ｎ１ｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｃｏｃｋ ｓｅｍｅｎ［Ｊ］．Ｆｏｌｉａ Ｂｉｏｌ （Ｋｒａｋｏｗ）。１ ９９２．４０（１－２）：６７－７１． ［３２］ＲＯＢＢＩＮＳ Ｐ Ｗ，ＴＲＩＭＢＬＥ Ｒ Ｂ，ＷＩＲＴＨ Ｄ Ｆ，ＨＥＲＩＮＧ Ｃ，ＭＡＬＥＹ Ｆ，ＭＡＬＥＹ Ｇ Ｆ，ＤＡＳ Ｒ，ＧＩＢＳＯＮ Ｂ Ｗ，ＲＯＹＡＬ Ｎ，ＢＩＥＭＡＮＮ Ｋ．Ｐｒｉ－ ｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅｎｚｙｍｅＥｎｄｏ一８～ Ｎ—ａｃｅｔｙ１ｇ］ｕｃｏｓａｍ１ｎ１ｄａｓｅ Ｈ［Ｊ］．Ｌ］Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，１９８４，２５９（１２）： ７５７７－７５８３． ［３３］ＤＡＮＵＬＡＴ已ＫＡＵＳＣＨ Ｈ，Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｉｎ ｆｉｓｈ［Ｊ］．Ｌ］．Ｆｉｓｈ Ｂｉｏ１． １９８４．２４：１ ２５－１３３． ［３４］ＴＳＵＪＩＢＯ Ｈ，ＦＵＪＩＭＯＴＯ Ｋ，ＴＡＮＮＯ Ｈ，ＭＩＹＡＭＯＴＯ Ｋ，ＩＭＡＤＡ Ｃ，ＯＫＡＭＩ Ｙ。ＩＮＡＭＯＲＩ Ｙ．Ｇｅｎｅｓｅａｕｅｎｃｅ。ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒ１ｚａｔ１０ｎ Ｏｆ Ｎ—ａｃｅｔｙ］一ｂｅｔａ—ｑ］ｕｃＯｓａｍ１ｎ１ｄａＳｅ ｆｒＯｍ ａ ｍａｒ１ｎｅｂａｃｔｅｒ１ｕｍ，Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ｓｔｒａｉｎ ０—７［Ｊ］． Ｇｅｎｅ。１９９４，１４６（１）：１１１—１１５． ［３５］ＩＣＨＩＫＡＷＡ Ｍ。ＩＣＨＩＫＡＷＡ Ｙ．Ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ－ｂａｓｅｄ ａｆｆｉｎ－ ｉｔｙ—ｌａｂｅｌ１ｎｇ ａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｕｓｅｉｎｉｓｏｌａｔ１ｎａ Ｎ— ａｃｅｔ．ｙ］ｇ］ｕｃＯｓａｍ１ｎ１ｄａｓｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２００１， １１：ｌ ７６９—１７７３． ［３６］ＰＥＴＥＲＢＡＵＥＲ Ｃ Ｋ，ＬＯＲＩＴＯ Ｍ，ＨＡＹＥＳ Ｃ Ｋ，ＨＡＲＭＡＮ Ｇ Ｅ， ＫＵＢＩＣＥＫ Ｃ Ｐ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄｅｘＤｒｅｓｓ１Ｏｎ０ｆ ｔｈｅ ｎａｇ１ ｇｅｎｅ（Ｎ—ａｃｅｔｙｌ—Ｂ－Ｄ—ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ－ｅｎｃｏｄ－ ｉｎｇ ｇｅｎｅ）ｆｒ０ｍＴｒ１ｃｈＯｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｐ１［Ｊ］．Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ， １ ９９６。３０：３２５－３３１． 岳Ｊ工
