一种猪流行性腹泻病毒空斑纯化方法

（12）发明专利申请

（21）申请号 CN201610623270.7 （22）申请日 2016.08.02 （71）申请人 浙江农林大学

地址 311300 浙江省杭州市临安市锦城镇环城北路88号

（10）申请公布号 CN106244563A

（43）申请公布日 2016.12.21

（72）发明人 邵春艳;王晓杜;孙静;姜胜;李群景;宋厚辉 （74）专利代理机构 杭州中成专利事务所有限公司

代理人 周世骏

（51）Int.CI

C12N7/00;

权利要求说明书 说明书 幅图

（54）发明名称

一种猪流行性腹泻病毒空斑纯化方法

（57）摘要

本发明涉及微生物病毒领域，旨在提供一

种猪流行性腹泻病毒空斑纯化方法。该方法包括步骤：用病毒维持液将待纯化的病毒样品进行梯度稀释；接种Vero E6细胞并培养，待长至单层且细胞密度达90％以上备用；用病毒维持液清洗Vero E6细胞表层2‑3次，加入梯度稀释的待纯化病毒液和病毒维持液后吸附2h；用无菌PBS清洗细胞表层后，覆盖半固体培养基培养4‑5天，直

至病毒空斑出现；挑取病毒空斑，获得病毒液。本发明明显缩短了PEDV纯化的时间，经过2‑3轮该操作，即可获得纯化的毒株。纯化后的毒株病毒滴度高，24h内可出现明显的细胞病变，便于病毒的大量培养与获取。该PEDV空斑纯化方法具有良好的应用前景，为疫苗的研制和相关科研的开展提供了技术支持。

法律状态

法律状态公告日

2016-12-21 2016-12-21 2017-01-18 2017-01-18 2020-08-14

法律状态信息

公开 公开

实质审查的生效 实质审查的生效

发明专利申请公布后的驳回法律状态

公开 公开

实质审查的生效 实质审查的生效

发明专利申请公布后的驳回

权利要求说明书

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说明书

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