福建分析测试￣ｕｊｉａｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ＆Ｔｅｓｉｔｎｇ 气相色谱法快速测定叶类蔬菜中拟除虫菊酯残留量 丁立平 （南平出入境检验检疫局。福建南平３５３０００） 摘要：本文建立了快速测定叶类蔬菜中拟除虫菊酯残留量的气相色谱方法。叶类蔬菜中的拟除虫菊酯经丙酮一石 油醚混合液超声波辅助提取，经中性氧化铝一石墨化碳柱净化，正己烷定容，用外标法定量，以气相色谱法 （ＧＣ一 ＥｃＤ）测定。试验结果表明：样品添加Ｏ．２０ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇＣｋｇ、０．０５ｍｇ，ｌ【ｇ水平联苯菊酯、三氯氟氰菊酯、顺式氰 戊菊酯和溴氰菊酯回收率分别为７８．５％～１０４．３％，８０．５％一１０６．５％，８５．３％一１０７％，８４．５—１０８．５％，最低检出限为 Ｏ．Ｏ０１ｐｐｍ，相对标准偏差小于５％。 关键词：气相色谱；拟除虫菊酯；超声波辅助提取；叶类蔬菜 中图分类号：０６５７．７１文献标识码：Ａ文章编号：１００９—８１４３（２０１１）０３—０Ｏ４０—０４ Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｌｅａｆｙ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｂｙ Ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｄｉｎｇ Ｌｉ—－ｐｉｎｇ （Ｎａｎｐｉｎｇ Ｅｎｔｒｙ—Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｎａｎｐｉｎｇ，Ｆｕｊｉｎ３５３０００，ａＣｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｋ由ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ． Ｔｈｅ ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｌｅａｆｙ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ Ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｃｅｔｏｎｅ－ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅ ｂｙ ｕｌｒｔｓｏｕｎｄ—ａｓｓｉａｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｎ Ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌ ａｌｕｍｉｎａ—ｇｒａｐｈｉｔｅ ｃａｒｂｏｎ ｃｏｌｕｍｎ ｔｏ ｅｍｏｖｅ ｉｒｍｐｕｒｉｔｉｅｓ，Ｃｏｎｓｔａｎｔ ｖｏｌｕｍｅ ｆ ｏｎ－ｈｅｘａｎｅ，ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ一 ＥＣＤ）ｗｉｈｔ ｈｅｔ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｅｓｔｓ ｆ ｏｅｃｒｏｖｅｒｙ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ｂｙ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｔｏ ｓｅｖｅｒｌ ｐｏｒｔａｉｏｎｓ ｏｆ ａ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｓａｍｐｌｅ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｏ．２０ ｍｓ／ｋｓ．０．１０ ｍｓ／ｋｓ ａｎｄ ０．０５ ｍｓ／ｋｓ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｂｉｆｅｎｔｈｒｉｎ，ｅｙｈａｌｏｔｈｒｉｎ，ｅｓｆｅｎｖａｌｅｒａｔｅ ｎｄ ｄｅｈａｍｅｔｈｒｉｎ ａｗｅｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｎｇｅ ｏｆ ａ７８．５％－１０４．３％，８０．５％－１０６． ５％，８５．３％－１０７％ａｎｄ ８４．５－１０８．５％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｈｅ Ｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｆｍｉｔ ｆ ｏｈｅ ｐｒｔｅｓｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ Ｗａｓ ０．００１ ｍｇ／ｋｇ，ｎｄ ｔａｈｅ ＲＳＤ Ｗａｓ ｌｅｓｓｔｈａｎ ５％． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ；ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｌｅａｆｙ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ 拟除虫菊酯类农药（Ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｓ）是一类高效、 安全、新型的杀虫剂。这类药剂对害虫有触杀和 多，主要有气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳、 薄层色谱、超临界流体色谱和光谱技术等实验室检 测技术，此外还有免疫分析法及活体生物测定法等 现场快速检测技术【ｌ１。但在出口蔬菜检测中最为常 胃毒作用，且触杀作用强于胃毒作用，其杀虫效 力一般比常用杀虫剂高ｌ０—５Ｏ倍，速效性好，击 倒力强；对农林、园艺、仓库、畜牧、卫生等多种害 虫，包括咀嚼式口器和刺吸式口器的害虫均有良 好的防治效果。自从１９４７年由美国人成功地合成 了第一个拟除虫菊酯一丙烯菊酯以来，这类农 药发展迅速，并成为影响我国蔬菜出口的３大类 农药残留之一。 目前，对拟除虫菊酯类农药的检测方法报道较 收稿日期：２０１０－６—２８ 用的还是气相色谱法，相关标准主要有ＧＢ／Ｔ ５００９．１４６—２００８、ＳＮ／Ｔ １ １ １７—２００８和ＮＹ厂Ｉ７６１—２００８ 三个 ，国内其他有关蔬菜内拟除虫菊酯类农药检 测研究的报道也有不少［５－８１，但是其前处理步骤都较 为复杂，不利操作，而且实验中使用溶剂较多，对环 境和实验人员身体有害。 本文针对叶类蔬菜中拟除虫菊酯类农药，建立 作者简介：丁立平（１９８０一），男，工程师，从事进出口食品中农药、兽药残留检测。Ｅｍａｉｌ：４３５４８６２４＠ｑｑ．ｃｏｍ 丁立平：气相色谱法快速测定叶类蔬菜中拟除虫菊酯残留量４１ 了利用超声波辅助提取和中性氧化铝一石墨碳柱 样品制备：取叶类蔬菜（以菠菜为例）约５００ｇ， 净化处理，经气相色谱法分析的方法。本方法具有 去根洗净，得可食部分，凉干至表面无水，切碎后用 快速、灵敏度高、重现性好等优点，能够较好地满足 均质机磨碎成浆状，装入洁净的容器中密封备用。 日常检测的需要。 １．４实验前处理 提取：用５０ｍＬ具塞离心管中称取５．００ｇ蔬菜 １ 实验部分 样品，加入１５ｍＬ混合提取液，涡旋３０ｓ，超声 １０ｒａｉｎ，加入２．０ｇ固体氯化钠，涡旋混匀，４０００ｒａｄ／ｓ １．１ 主要仪器 离心５ｍｉｎ，取上清液于２５ｍＬ塑料试管中于４５％下 Ａｊｌｅｎｔ７８９０Ａ气相色谱仪，配有微池电子捕获检 吹干，残渣重新提取１次，吹干，待净化。 测器（ＩＸＥＣＤ），自动进样器（美捷伦科技有限公 净化：石墨碳ＳＰＥ小柱上加０．５ｇ中性氧化铝， 司）；ＨＰ一５色谱柱（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５ ｍ）石英毛 用５ｍＬ丙酮一石油醚混合液（ｖ：ｖ＝１：１）淋洗柱体，弃 细管色谱柱（美捷伦科技有限公司）； 去淋洗液。 ＫＱ一５００ＴＤＢ超声波清洗器（上海昆山仪器设备 向离心管加１．０ｍＬ丙酮一石油醚混合液（ｖ： 厂）；ＨＧＣ一１２Ａ氮吹仪（天津恒奥科技公司）；均质 ｖ＝ｌ：１）涡旋溶解样品，上柱，加８ｍＬ丙酮一正己烷 器（上海医疗器械公司）；涡旋混合器（德国ＩＫＡ公 混合液（ｖ：ｖ＝１：９）洗脱，收集全部洗脱液，４５℃下吹 司）；台式离心机（北京时代北利离心机有限公司）； 干，正己烷定容至１．ＯＯｍＬ，待气相色谱分析。 Ｖｉｓｉｐｒｅｐ ＤＬ ＳＰＥ固相萃取装置（美国ＳＵＰＥＬＣＯ公 １．５色谱条件 司）；５０ｍＬ具塞离心管，２５ｍＬ具塞塑料试管；１５ｍＬ 载气和尾吹气：氮气（纯度＞９９．９９９％），载气流 塑料离心管。 量：１．００ｍＬ／ｍｉｎ，尾吹气流量：３０．ＯｍＬ／ｍｉｎ。柱温：初 １＿２试剂 始温度７０％２保持１．０ｍｉｎ，以２０℃／ａｒｉｎ升至２７０￣Ｃ， 中性氧化铝（粒度：７５—１５０ ｍ），活性炭（分析 保持１ｒａｉｎ；以１℃／ｍｉｎ升至２８５℃，保持０ｍｉｎ；以 纯），氯化钠（分析纯），丙酮，石油醚（沸程３０￣Ｃ ２０￣Ｃ／ｍｉｎ升至３０＆Ｃ，保持ｌｍｉｎ。进样口温度： ～６０℃），正己烷（以上试剂均购自国药集团化学试 ２５０￣Ｃ；检测器温度：３００￣Ｃ。进样方式：不分流；进样 剂有限公司）： 量：１ Ｌ。 石墨碳固相萃取柱：容量３ｍＬ，２５０ｍｇ（美国 ２结果与讨论 联苯菊酯、三氯氟氰菊酯、顺式氰戊菊酯和溴 氰菊酯标准品（针剂型，１００ ｇ／ｍＬ，农业部环境保 ２．１标准曲线和检出限 护科研监测所）； 将拟除虫菊酯标准储备液稀释至０．８０、０．４０、 丙酮，石油醚，正己烷为农残级试剂，水为蒸馏水。 ０．２０、０．１０、０．０５ ｇ／ｍＬ使用液，以标准品响应值Ａ １．３样品制备 为纵坐标，工作液浓度ｃ（ ｇ／ｍＬ）为横坐标绘制标 标准品的配制：拟除虫菊酯标准品保存在４￣Ｃ 准工作曲线，并按照Ｓ／Ｎ＝３计算得到最低检出量， 冰箱中，使用时用正己烷配制成２．０ ＃ｍＬ储备液， 其线性方程、相关系数和方法检出限，见表１。 并根据需要配制成相应的使用液。 表１ 线性方程、相关系数和检出限 ４２ 福建分析测试技术交流 ２．２回收率和精密度 每个水平做６个重复样品。 通过外标法定量，得到相应添加平均回收率和 称取阴性蔬菜样品，添加适宜浓度的拟除虫菊 酯标准液，制得所需要的阳性添加样品，并按照上 述实验方法进行检测。本方法选择３个水平添加， 批间相对标准偏差，测定结果见表２，标准样品谱图 见图１，添加０．０１ｍｇ／ｋｇ浓度样品图见图２。 表２菊酯３个浓度水平的添加回收率 №哪 珊 番№ｌ耄 伽 舢 ｝ 渤 咖 渤 善伽 渤 善； 锄 ：Ｉ、 ，ｉ ～ １４ １６ １８ ２０ ２２ ２４ ｍｉｎ 图１标准谱图 １．联苯菊酯；２．三氯氟氰菊酯；３．顺式氰戊菊酯；４．溴氰菊酯 Ｆｉｇ．１ ＳｔａＪ１ｄａｒｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ １．ｂｉｆｅｎｔｈｒｉｎ；２．３ Ｃｙｈａｌｏｔｈｒｉｎ；３．ｅｓｆｅｎｖａｌｅｒａｔｅ；４．ｄｅｌｔａｍｅｔｈｒｉｎ 图２添加０．１ ０ｍｇ／ｋｇ浓度的样品谱图 Ｆｉｇ．２ Ａｄｄ ０．１Ｏｍｇ／ｋｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｐｅｃｔｒａ ２．３讨论 取的时间和超声温度两个条件，最终确定温度控制 在３０℃，超声提取１０ｍｉｎ，同时，采用二次超声提取 的条件较优。 ２．３．１提取液的选择和超声波辅助提取条件的优化 试验中选择丙酮一正己烷（ｖ：ｖ＝１：１）混合液，丙 酮一石油醚（ｖ：ｖ＝１：１）混合液两种提取液提取，从提 取效果来看，两者之间没有较大差别，但是使用丙 酮一石油醚混合液回收率较高，而且吹干时间较 短，可以提高工作效率。 ２＿３．２ ＳＰＥ净化柱条件的优化 由于石墨碳柱容量大，脱色效果明显，对于净 化富含色素的叶类蔬菜样品效果较好，因此试验中 首先考虑选择以石墨碳柱来净化样品。但是，从得 到添加标准物质样品色谱图来看，单纯使用石墨碳 柱对于去除杂质效果不够理想，有部分酚类物质尚 未去除，并对菊酯检测检造成影响。单独使用石墨 碳柱净化样品色谱图见图３。 超声波可以通过加速介质质点运动、空化作用 和振动匀化作用，达到使固体样品分散，增大样品 与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转 移到液相的传质速率的目的。试验中考察了超声提 咖 ４ ５ 咖 ３ ２ １ ｏ 丁立平：气相色谱法快速测定叶类蔬菜中拟除虫菊酯残留量 ４３ 图３使用石墨碳柱净化样品色谱图 在向石墨碳柱上添加０．５ｇ中性氧化铝后，添加 标准物样品的色谱图峰型和分离度明显改善，能够 较好的满足检测需要。效果图见图２。№ 咖㈣ Ｏ ０ ０ ０ Ｏ ，㈣ ㈣ 瑚 喜 ，； ， 渤 考虑到氧化铝有助于提高菊酯和杂质的分离 效果，同时活性炭有助于去除色素，因此，试验中采 用中性氧化铝／活性炭（ｗ：ｗ＝４９：１）２．０ｇ装于５ｍＬ注 射器针管做成自制ＳＰＥ柱，柱体经３．０ｍＬ丙酮一石 油醚（（ｖ：ｖ＝１：１））淋洗，样品经提取后用１．０ｍＬ丙酮 一石油醚（（ｖ：ｖ：１：１））溶解上柱，丙酮一正己烷混合 液（（ｖ：ｖ＝２：８））８．０ｍＬ洗脱，收集全部洗脱液，吹干定 容至１．００ｍＬ分析。从试验结果来看，添加０．０１ｍｇ／ｋｇ 的６个样品回收率可以达到８６．６％一１０５．２％，也可 以满足日常检测需要，同时可以降低使用商品石墨 碳柱的成本。添加０．１０ｍｇ／ｋｇ样品谱图见图４。 ３ 结 ｉ４－ 本文采用丙酮一石油醚混合液作为提取液，通 过超声波辅助提取快速高效地实现叶类蔬菜中拟 除虫菊酯的提取，使用中性氧化铝一石墨碳混合柱 层析去除样品杂质，实现目标物提取完全，净化效 果理想的试验效果。测定结果可靠，方法灵敏度高， 添加０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ水平联苯菊 酯、三氯氟氰菊酯、顺式氰戊菊酯和溴氰菊酯回收 图４添ＪＪｎｏ．１０ｍＯ／ｋｏ浓度蔬菜样品中性氧化铝柱 层析净化的样品谱图 率分另０为７８．５％一１０４＿３％，８０．５％一１０６．５％，８５．３％ 一１０７％，８４．５—１０８．５％，批问ＲＳＤ范围分别为２．０８％ 一４．２６％，２．６８％一３．８６％，１．９３％一３．２３％，１．５５％一３． ８１％，最低检出限为０．Ｏ０１ｍｇ／ｋｇ，完全可以满足日常 农药快速分析的要求。 参考文献 【１】孙成玲，汪付星．拟除虫菊酯农药残留检测技术研究进展 【Ｊ１．环境科技，２００９，２２（６）：６３—６６． 【２】ＧＢ／Ｔ ５００９．１４６—２００８植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯 类农药多种残留量的检测【ｓ】．北京：中国标准出版社，２００９． ｆ３】ＳＮ／Ｔ １１１７—２００８进出口食品中多种菊酯类农药残留量测 定方法气相色谱法【ｓ】．北京：中国标准出版社，２００８． 【４】ＮＹｆＩ＇７６１—２００８蔬菜水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和 氨基甲酸酯类农药多种残留的测定【ｓ】．北京：中国农业出 版社，２００８． ［５】王荟，周春宏．植物性食品中拟除虫菊酯类农药测定方法 的改进【Ｊ】．中国环境监测，２００８，２４（６）：３７—３９． 【６】金戈辉，焦阳．气相色谱法测定水果、蔬菜中多种拟除虫菊 酯类农药残留【ＪＪ．检验检疫科学，２００８，４：４ｌ＿４３． ｆ７】蒋迎，郑平，鲁成银．基于基质固相分散萃取的茶叶中拟除 虫菊酯多农残气相色谱测定［Ｊ】．茶叶，２００７，３３（３）：１４７—１４９． 【８】董娟，罗小玲，谢勇，等．胡萝ｂ及胡萝ｂ汁中百菌清和拟除 虫菊酯类农药的分析研究【Ｊ】．现代食品科技，２００９，２５（１）： １０８－１】０．
