一种在毕赤酵母内表达蛋白的方法

（12）发明专利申请

（21）申请号 CN201710400556.3 （22）申请日 2017.05.31

（71）申请人 武汉金开瑞生物工程有限公司

地址 430206 湖北省武汉市东湖开发区高新大道818号高科医疗器械园B11号

（10）申请公布号 CN106978434A

（43）申请公布日 2017.07.25

（72）发明人 沈鹤霄;华权高;马峰

（74）专利代理机构 北京众达德权知识产权代理有限公司

代理人 刘杰

（51）Int.CI

权利要求说明书 说明书 幅图

（54）发明名称

一种在毕赤酵母内表达蛋白的方法

（57）摘要

本发明提供了一种在毕赤酵母内表达蛋白

的方法，包括如下步骤：(1)根据酵母细胞偏爱密码子优化原始T7 RNA聚合酶基因序列；优化后的T7 RNA聚合酶基因序列如SEQ ID NO:1所示；按照优化的序列合成上、下游带酶切位点的T7聚合酶基因片段；(2)将T7 RNA聚合酶基因片段克隆到组成型毕赤酵母表达质粒pGAPZ A中，构建得到pGAPZ A‑RNAP质粒，并转化至毕赤酵母表达菌株，筛选获得稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株；

(3)将外源基因克隆至表达载体的多克隆位点上，转化至步骤(2)中的稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株，以及表达蛋白。本发明在毕赤酵母内使用T7转录系统来表达蛋白，转录效率高，表达蛋白量大，所述方法无需筛选高表达的菌株，耗费时间短。

法律状态

法律状态公告日

2017-07-25 2017-07-25 2017-08-18

法律状态信息

公开 公开

实质审查的生效

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公开 公开

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权利要求说明书

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说明书

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