名词解释
1、酶：指活细胞产生具有催化活性和高度专一性的特殊生物大分子，包括蛋白质和核酸。 2、酶转换率（催化效率常数Kcat）：酶被底物完全饱和时，每单位时间内每个酶分子所能转化的底物分子数。
3、酶比活力：指每毫克蛋白质所含有酶的活力单位数，一般用IU/mg表示，一般来说，酶活力比越高，酶越纯。
4、酶活力：也称酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力，是用在一定条件下，他所催化某一反应的反应初速度来表示。
5、固定化酶：是通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚在一定的空间内，酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用。
6、酶分子的化学修饰：就是在分子水平上对酶进行改造，以达到改造和改性的目的。即是在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团，也别是具有生物相容性的物质，进行供价连接，从而改变酶的结构和性质。
7、生物反应器：在生物反应过程中，利用生物催化剂进行生化反应，将原料转化为产物的核心装置。根据使对象不同，氛围酶反应器和细胞反应器。
8、生物传感器：是一种分析测试装置，具有转移、灵敏、快速、简便、准确的有点，用于测定混合物溶液中某种物质的浓度。
9、酶传感器：是以固定化酶作为感受器，以基础电极作为换能器的乘务传感器，是应用最早和最广的生物传感器。 10、半合成抗生素：指用化学法或酶法改造已知抗生素的化学结构，所产生的抗生素衍生物。 11、酶反应器：指以游离酶或固定化酶、固定化细胞作为生物催化剂，进行酶促反应的装置。 12、细胞反应器：指利用增殖细胞内的酶系将培养基中的成分转化成产品的装置。 13、固定化细胞：固定在载体上并在一定空间范围内进行生命活动的细胞。
14、组成酶：指机体中一直存在的，其合成仅受遗传物质控制，与外界环境无关的酶类。 15、诱导酶：指在通常情况下不合成或者合成很少，当加入诱导物后就大量合成的一类酶。 16、尾产物阻遏：指当有些酶的作用产物积累到一定浓度，并能满足机体需要后，酶的合成就受阻的一种现象。
17、分解代谢阻遏（葡萄糖效应）：指当细胞在容易利用的碳源（葡萄糖）上生长时，有些酶，特别是参与分解代谢的酶类，其合成受阻的现象。这种阻遏与cAMP（腺苷酸环化酶）有关，加入腺苷酸环化酶可以减轻或者解除这种阻遏。 问答题
1产酶菌种的要求？
对生产酶的菌种来说，一般必须符合一下条件：一是不是致病菌；二是生产周期较短，产酶量高；三是菌种不易变异退化，不易感染噬菌体；四是最好选用产生胞外酶的菌种，有利于酶分离；最后，如果是医药或食用酶，还应考虑起安全性问题。 2操纵子的构成及其功能？
操纵子是有结构基因、启动基因、操纵基因等组成的染色体上控制蛋白质合成的功能单位。结构基因载有有关酶的密码，决定酶的结构和性质；操纵基因在操纵子中起着开关的作用；操纵基因的开关又受调节基因的调节。 3、酶生物合成的模式及其特点？
A、同步合成型：指酶合成与细胞生长同步。
B、延续合成型：指酶的合成伴随着细胞的生长而开始，但在细胞进入平衡期后，酶还可以延续合成较长一段时间。
C、中期合成型：指酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而在进入细胞平衡期以
后，酶的合成也终止。
D、滞后和合成型：只有当细胞大量合成以后酶才开始合成并大量积累。 4、为什么延续合成型是最理想的产酶方法？
因为细胞开始生长时就有酶的产生，细胞生长进入平衡期以后，酶还可以延续生成一段时间。mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在，是影响酶生物合成模式的主要因素。其中：mRNA稳定性高的，可以在细胞停止生长后继续合成其对应的酶；mRNA稳定性差的，随着细胞停止生长而终止酶的合成；不受培养基中阻遏物阻遏的，可随着细胞生长而开始酶的合成；受阻遏的酶，要在细胞生长一段时间或者平衡期后，解除阻遏，酶才开始合成。 5、酶的固定化方法及其优缺点？ 吸附法 吸附法制备固定化酶操作简单，可充分选择不同电荷、不同形状的载体，吸附过程可以同时纯化酶，固定化酶在使用过程失活后可重新活化，同时，载体可以回收再利用；同时，此法固定化酶酶易脱落，影响产物纯度和酶操作的稳定性。 包埋法操作简单，可以制的较高活力的固定化酶，对大多数酶、粗酶制剂甚至完整的微生物细胞都是使用的。但是，只有小分子底物和底物可以通过凝胶网络，而对大分子不适宜，同时导致酶的活力降低。 酶与载体结合牢固，酶不易脱落，但反应条件较激烈，酶易失活，同时，制作手续亦较繁琐。 操作简单，酶的固定化程度好；但是交联反应过于激烈，许多酶固定化过程中失效，回收率不高。 包埋法 共价键结合法 交联法 6、固定化酶的性质？
（1）与其溶液酶相比，大多数固定化酶活性下降。原因：酶与不溶性载体相结合引起结构发生变化；有时还会发生酶与载体多点结合，酶活性中心的重要氨基酸残基与载体相结合；固定化酶的空间位阻，妨碍了底物进入酶的活性点。
（2）固定化酶的稳定都较其溶液酶有了较大的提高，延长了有效寿命。由于：固定化增加了酶构象的牢固程度；固定化挡住了不利因素对酶的侵袭；了酶分子间的相互作用。稳定性表现在：热稳定性，pH—酶活力关系，对蛋白酶的抵抗力提高，对变性剂、抑制剂的抵抗力提高，操作稳定性，储藏稳定性。 7、简述聚乙二醇广泛用于生物修饰的原因？
聚乙二醇是线性分子，具有良好的生物相容性和水溶性，在体内无毒性、无残留、无免疫原性，可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以与酶产生交联，因而被广泛用于酶的修饰。
8、简述修饰酶的性质？
修饰酶的热稳定性；修饰酶的抗原性；修饰酶对各类失活因子的抵抗力；修饰酶在体内的半衰期；最适pH；Km的变化。 9、蛋白酶活力测定的原理？
蛋白酶在一定温度和pH条件下，水解酪蛋白底物，产生不被三氯乙酸沉淀的含有酚基的氨基酸，在碱性条件下，将福林试剂还原，生成钼蓝与钨蓝，该蓝色化合物，在680nm处有吸收，其吸收值与酪氨酸含量成长比，通过测定一定条件下产物酪氨酸含量的变化，即可测定蛋白酶的活力。（Folin-酚试剂） 10、淀粉糖化的步骤及DE值测定的原理？
淀粉的水解分两步，第一步是利用α-淀粉酶将淀粉液化转为糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加，这个过程称为液化；第二步是利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解，转变为葡萄糖、麦芽糖、低聚糖混合物，这一过程即为糖化。
DE值测定的原理：采用3，5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量。还原糖在碱性条件
下加热呗氧化成糖蒜以及其他产物，3，5二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度只，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。 11、酵母细胞固定化原理及步骤？
酵母细胞固定化的方法是把细胞悬浮在海藻酸钠溶液中，滴进氯化钙溶液中，形成海藻酸钙凝胶小球。细胞包埋在凝胶的小孔中，制成固定化细胞。通过包埋法，对酵母活细胞进行固定。
步骤：调取活化培养24h的酵母鞋面菌种一环，接种于10ml麦芽汁试管中，25℃摇瓶培养48h；取酵母菌体悬浮液10ml，悬浮在10ml4%海藻酸钠溶液中混合均匀；用灭过菌的注射器吸取上述悬浮液，逐滴滴入到50ml氯化钙溶液中，浸泡30~120min使之形成凝胶珠；待凝胶珠在溶液中浸泡30min后，滤除凝胶珠得到固定化细胞。 12、醋酸杆菌分离原理？
分离醋酸杆菌采用溴酚蓝作为指示剂，在坚定培养基上根据有无变色圈（黄色）来判断是否产酸，若有黄色变色圈则说明产酸，可能为醋酸杆菌，再根据进一步定性实验，直到分离出醋酸菌。
13、简述以酰化-DL-氨基酸制备酰化-L-氨基酸的步骤？
首先用氨基酸酰化酶不对称地水解酰化-DL-氨基酸，则产生L-氨基酸和酰化-D-氨基酸；然后余下的酰化-D0氨基酸可以用消旋酶消旋，继续光学拆分，直到全部转换为L-氨基酸。 14、将青霉素G或V改造成半合成青霉素的步骤？
首先将青霉素G和V裂解成6-氨基酸霉烷酸（6-APA），然后以6-APA为中间体，再起NH2上接上不同的侧链，如苯甘氨酸等，产生一系列半合成青霉素。 综合
1、产蛋白酶菌株的分离是根据“水解透明圈”的有无来判断是否获取。
2、高产蛋白酶菌株的诱变方法：物理诱变——紫外线；化学诱变剂——亚。 3、微生物细胞固定化方法：吸附法、包埋法、不用载体法。
4、微生物细胞在固定化后安生长状态分类：固定化死细胞、活细胞、固定化增殖细胞。 5、酵母细胞固定化最后形成的是海藻酸钙凝胶小球。 6、酶工程的核心是：细胞固定化 和 酶固定化。
7、培养基营养成分：碳源、氮源、无机盐、生长因子、微量元素、产酶促进剂。 8、发酵条件对产酶的影响：温度、湿度、pH、通气量、搅拌、泡沫。 9、发酵方法：固定发酵法 和 液体发酵法（液体深层发酵法为主）。 10、酶的分离提纯的环节：抽提、纯化、制剂。
11、酶的分离纯化过程中应注意的问题：注意防止酶的变性失活；不破坏酶的条件下尽可能去除杂质；保证酶的催化活性；。
12、酶活力测定过程中注意的问题：测定的酶的反应速度必须是初速度；底物浓度、辅助因子浓度必须大于酶浓度；反应必须在酶的最适条件下进行。
13、酶蛋白在细胞内外的分布情况：胞内酶——溶酶，游离在细胞内的酶；结酶，牢固与膜或者细胞颗粒结合在一起的酶。 胞外酶——释放到细胞外的酶。 14、结晶即是一种酶是否纯化的标志，也是一种酶杂合蛋白的分离方法。
15、根据分子大小轻重设计的方法：离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法；
根据溶解度大小分离的方法：盐析法、有机溶剂沉淀法沉淀法、共沉淀法、选择性沉淀法、等电点； 按分子所带正负电荷多少分离方法：离子交换分离法、电泳分离法、聚焦层析法； 按稳定性差异的分离方法：选择性热变性法，选择性酸碱变化法、选择性表面变性法； 按亲和力作用的分离方法：亲和层析法、亲和电泳法。
16、离心分离：差数离心；密度离心——速度离心和等密度离心
17、凝胶的选择：葡聚糖凝胶—Sephadex G，符号G-X，x表示每克干胶吸水量的10倍； 聚丙烯酰胺凝胶：Bio-Gel P,P后的数字乘以1000表示其分离的最大分子量； 琼脂糖凝胶：Sepharose,有2B,4B,6B的规格。
18、用盐析法调整溶解度最常用的硫酸铵作为调节剂。
19、带阳电荷离子交换基的交换剂在离子交换过程中吸附阴离子，称为阴离子交换剂； 带阴电荷交换基的交换剂可吸附阳离子，叫阳离子交换剂。 20、区带电泳中的凝胶电泳，兼有分子筛效应，浓缩效应，电荷效应
等电聚焦电泳测定的是等电点；SDS-PAGE测定的是蛋白质的分子量。
21、亲和层析的核心是亲和吸附剂；亲和分离的步骤：亲和吸附；洗涤洗脱；再生。 22、辅酶的固定方法：载体结合法 和 包埋法。
23、动植物细胞的固定化方法：吸附法 和 包埋法。
24、酶分子的体外改造可分为：酶分子的表面修饰 和 酶分子的内部修饰。常用的修饰
剂有：聚乙二醇、右旋糖酐、肝素、蔗糖聚合物等。其中聚乙二醇应用最广。 25、酶化学修饰的目的：主要是提高没的稳定性和消除作为外援物质在体内的抗原性。 26、氨基的化学修饰：乙酸酐修饰、2，4，6-三硝基苯磺酸修饰、2，4-二硝基氟苯修饰、
氨基的烷基化、丹磺酰氯（DNS）修饰、苯丙硫氰酸酯（PITC）修饰（即Edman反应）。 羧基的化学修饰：水溶性羰二亚胺或氨化反应；硼氟化三甲锌盐反应；甲醇—HCl酯化
反应。
27、酶蛋白修饰反应的主要类型：氨基化反应；烷基化反应；氧化还原反应；芳香环取代反
应；
28、固定化酶反应器：填充床反应器（固定床反应器）适合于各种形状的固定化酶和不含
固体颗粒、粘度不大的底物溶液，以及有产物抑制的转化反应；流化床反应器（FBR）可用于处理黏度较大和含有固体颗粒的底物溶液。
29、酶反应器生产能力下降的原因：酶本身的失活；酶从载体上脱落（需要解决注意的重要
问题）；载体的破碎或溶解。 计算
米氏方程：Vmax=k0【E】 , k0=Vmax/【E】。K0即为转换率（也
用Kcat表示），单位为1/s。如果每个酶分子只有一个活性中心，（酶浓度）即用mol表示；如果每个酶分子有几个活性中心时：【E】mol=（酶的g数）除以（酶的分子量）乘以（活性中心数） 比活力=总活力除以总蛋白，单位IU/mg；纯化倍数=每次的比活力除以第一次的比活力；
产率（回收率）=每次的总活力除以第一次的总活力乘以100%
