湖南农业科学２０１０，（３）：７１～７３，７６ 乙酰胆碱酯酶法在农药残留检测中的应用及质量控制 李卫霞 （重庆三峡学院生物系，重庆万州４０４０００） 摘要：对乙酰胆碱酯酶法的基本原理、类型及其在农药残留检测中的应用进行了概述，并对农药残留检测质量控制过程中存 在的问题作了重点讨论。 关键词：乙酰胆碱酯酶；农药残留；质量控制 中图分类号：￥４８１．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—０６０Ｘ（２０１０）０３—００７１—０３ 随着工农业生产的迅速发展，环境污染问题日 ２乙酰胆碱酯酶法分类 益显著，人们对于食品安全问题也日益关注。我国 是农药使用的大国，农药残留的现象普遍存在，然 酶抑制法依据其特异性抑制昆虫中枢和周围 而现有的一些检测方法已无法满足高灵敏度的要 神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，破坏神经的正 求，因此建立一种快速灵敏的农药残留检测方法具 常传导，使昆虫中毒致死的毒理学原理，将乙酰胆 有十分重要的意义。酶法操作简单，速度快，不需要 碱酯酶与样品反应，根据乙酰胆碱酯酶活性受抑 昂贵仪器，适应于现场监测和对大规模食品的筛选 制程度，检测样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药含 检测，被广泛用于野外农药残留快速检验。可用于 量。乙酰胆碱酯酶对有机磷农药较敏感，测定的灵 农药残留检测的酶有羧酸酯酶、丁酰胆碱酯酶及乙 敏度高，选择性强。在实际应用中主要包括速测卡、 酰胆碱酯酶，前两种酶受干扰因素多，假阳性率高， 速测仪、生物传感器三种类型。 专一性低［１－２］。乙酰胆碱酯酶（ａｃｅｔｖｌｃｈ０ｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ， ２．１速测卡 ＡＣｈＥ）由于具有较好敏感性及较高的活性，在有机 速测卡即酶抑制试纸法，将从敏感生物体内提 磷和氨基甲酸酯类农药检测中应用广泛。 取的乙酰胆碱酯酶和乙酞胆碱类似物２，６一二氧靛 酚乙酸醋分别固定到滤纸上。如果样品中不含有有 １乙酰胆碱酯酶法原理 机磷或氨基甲酸醋类农药，则靛酚乙酸醋在酶的 乙酰胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键 催化下生成蓝色靛酚。当样品中含有有机磷或氨基 性酶，能够高效水解神经递质乙酰胆碱，保证神经 甲酸醋类农药，乙酞胆碱醋酶则与其结合，失去了 冲动在突触问的正常传导，它的活性受到有机磷或 催化靛酚乙酸醋的能力。该方法简单实用，即通过 氨基甲酸酯类农药的特异性抑制，故而成为监控有 肉眼观察卡片的颜色确定农残是否超标。这种方法 机磷农药的靶酶［３１。乙酰胆碱酯酶催化的反应如下： 的检出限为０．３—１０．０ ｍｇ／ｋｇ［５１。 ＨＯ（ＣＨ３）３ＮＣＨ２ＣＨ２ＯＯＣＣＨ３（乙酰胆碱）＋ ２．２速测仪 Ｈ２０一Ｈ０（ＣＨ３）３ＮＣＨ２ＣＨ２０Ｈ（胆碱）＋ＣＨ３ＣＯＯＨ 速测仪即酶抑制分光光度法，是将分光光度计 利用这一特性，用滤纸片或电极作为载体，将 进行改装和简化，配上检测试剂（多是将底物、酶、 乙酰胆碱酯酶吸附在上面，加入显色剂，如果酶的 显色剂制成三种不同颜色的药片），测定方法与常 活性没有被抑制，则生成的产物可以使显色剂显 规酶活力测定方法相同，以酶活性抑制率为指标判 色，如果被测样品中含有农药残留则酶活性被抑制 定是否农残超标。该方法具有较高的可靠性和灵敏 不能生成水解产物，显色剂不显色。根据颜色的变 性，且操作简单，测定速度快，是目前常用的方法， 化或测定酶与某种特定化合物反应的物理化学信 很适合于水中和市售新鲜蔬菜的农残快速检测，检 号的变化，可判断是否存在有机磷及氨基甲酸酯类 测限在０．０２９～１０．０ ｍｇ／Ｌｔ￣。 农药嗍。 ２－３ 生物传感器 生物传感器是根据生物敏感部件与特定分析 物之间的反应产生的一些物理化学信号的变化，将 收稿日期：２０１０—０１—１１ 其转化后记录下来。检测灵敏度和准确度有了很大 基金项目：重庆三峡学院青年资助项目（２００８一ｓｘｘｙｒｃ—ＯｌＯ） 作者简介：￣（１９７６一），女，河北行唐县人，讲师，硕士，主 的改善，自动化程度和现场检测能力等方面有了较 要从事蛋白质免疫学研究。 高的提高，检测限可达２０ ｐｐｂｔ￣。包括电流型生物传 ７２ 湖南农业科学 第３期 感器和电位型生物传感器，前者的工作原理：底物 氯化乙酞硫代胆碱在胆碱醋酶的催化作用下可以 水解为乙酸和琉基胆碱，当胆碱醋酶被农药抑制 时，氧化电流的大小能准确地反应酶被抑制的程 度，从而检测出农药残留的浓度［７／。而电位型传感器 则中电位性传感器是将酶反应产生的ｐＨ值变化 由传感器测出，从而间接测定有机磷农药残留量嘲。 与乙酰胆碱酯酶形成超分子复合物，产生了特征荧 光峰。而有机磷农药可破坏此复合物使硫代黄素Ｔ 的特征荧光峰被猝灭，猝灭强度与对氧磷浓度存在 线性关系。若利用此原理制备出检测ＡＣｈＥ抑制剂 的荧光光纤生物传感器，拥有检测迅速、灵敏度高、 线性范围较宽、不需要消耗酶底物和抗干扰能力强 等特点，具有较好的应用前景。 ３ 乙酰胆碱酯酶法在农残检测中的应用 由于有机磷、氨基甲酸酯类农药使用不当或误 食这两类农药残留量超标的蔬菜而引起的中毒现 象一直十分严重。使用酶抑制法检测农药残留量从 ２０世纪５Ｏ年代开始陆续有报道。酶抑制分析法与 其它分析方法相比，最大的特点就是它的特异性， 分析速度也比较快。 利用酶抑制法比色原理生产的各种速测卡、速 测仪正逐步进入果蔬生产基地、农贸市场、超市及 监督部门，成为我国农药残留快速测定的主流技 术。赵建庄嘲用自行研制的便携式农药残留速测仪， 对果蔬中农药残留毒性进行快速检测，可以直接显 示有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的 抑制率，确定农药残留毒性水平。２００７年李昕等应 用家蝇头部提出的乙酰胆碱酯酶检测果蔬上１０种 有机磷和氨基甲酸酯农药，检测灵敏度０．００１～０．１ ｍｇ／ｋｇ范围。与目前国内外使用的同类检测方法相 比，如各种速测仪、酶纸片法检测灵敏度一般在 ０．１～１０．０ ｍｇ／ｋｇ范围，检测灵敏度有显著提高｛９１。 乙酰胆碱酯酶法除用于食品及果蔬中农药残留 的检测，还可用于检测水体污染状况。宋燕华等［】明ｊ 乙酰胆碱酯酶为生物标志物进行钱塘江水环境野 生鲫鱼有机磷农药暴露的研究发现，部分地区野生 鲫鱼血乙酰胆碱酯酶活性受到抑制，说明水环境中 水环境中存在机磷农药的污染。此外，中药材中有 机磷和氨基甲酸酯农药残留的测定方法主要有气 相色谱法，气相色谱一质谱法等，这些检测方法需对 样品进行分离、提取、衍生化等预处理，耗时，且不 适用于现场快速检测。２００９年陈安珍等…】用胆碱酯 酶法对中药材中的有机磷和氨基甲酸酯进行检测， 最低检出浓度为０．１ ｌａ，ｇ／ｍＬ。 ・ 生物传感器是目前农药残留分析技术的研究 热点。２００３年魏福祥 ２】将活化好的纤维素膜浸 入到乙酰胆碱酯酶、戊二醛、牛血清白蛋白的混合 液中，采用共价交联法制备出酶片，制备出安培型 生物传感器。２００８年柳娜等＿ｌ３研究发现硫代黄素Ｔ ４质量控制因素 影响酶抑制法检测效果的因素很多，与酶源、 有机磷农药类型检测系统等均有关系，从而造成检 出限相差较大。源白不同物种或取自一个生物体的 不同组织的一种酶，其活性测定的最适条件经常会 变化，影响条件通常包括最适ｐＨ值、酶促反应时 问及温度及抑制剂等方面【 。 ４．１酶源 酶抑制法常用的酶源有：植物酶、牛、猪等家畜 的肝脏酯酶、人血浆或血清、马血清、蝇或蜜蜂头部 的脑酯酶、兔或鼠的羧酸酯酶等［Ｉ５Ｉ。但不同种类、不 同来源的酶源对检测灵敏度具有较大的影响。１９９６ 年余孝颖等［ ６１研究发现，家蝇头部乙酰胆碱酯酶对 有机磷和氨基甲酸酯类农药的敏感度要优于其他 来源的胆碱酯酶。从昆虫组织中提取的乙酰胆碱酯 酶粗酶液中除了含乙酰胆碱酯酶外，还有其他多种 酶类的存在，会显著影响到酶的特性，其中一些酶 是解毒酶，能够催化水解农药，也有些酯酶能够作 为乙酰胆碱酯酶的替代靶标，起到保护乙酰胆碱酯 酶的作用。实验中如果用分离纯化后的酶液作为乙 酰胆碱酯酶源来测定酶的动力学特性和抗抑制性， 则能避免这些问题旧。 此外在淡水鱼及海洋鱼类中也可以提取胆碱 酯酶，淡水鱼中首鱼科中的大黄鱼、小黄鱼、黄姑 鱼、白姑鱼肌肉中的胆碱酯酶对有机磷化合物相当 灵敏，除小黄鱼酶液比活较低外，其余３种鱼的酶 溶液比活基本相同 。２００８年邱朝坤等 １研究发现 鲫鱼不同组织中乙酰胆碱酯酶活性存在很大差异， 鱼脑酶活为３５，２４２ ｐ，ｍｏｌ／ｍｉｎ・ｇ，肝脏酶活为４．８２６ ￣ｍｏｌ／ｍｉｎ・ｇ，肌肉酶活为２６．０１８／ａ，ｍｏｌ／ｍｉｎ・ｇ。 ４．２酶的固定化 乙酰胆碱酯酶的固定化技术在酶抑制显色法、 检测农药残留及生物传感技术的开发中受到广泛 的关注『１９１。目前应用较为广泛的固定化技术主要有 吸附法、交联法、电聚合法等［２０－２ １。２００７年王烨等【２２】 研究发现，以壳聚糖为载体，吸附一交联法制备乙 第３期 李卫霞：乙酰胆碱酯酶法在农药残留检测中的应用及质量控制 酰胆碱酯酶膜，经检测固定化酶Ｋｍ较游离酶的 ５发展前景 利用有机磷和氨基甲酸酯类农药特异性抑制 Ｋｍ降低，最适ｐＨ值升高。乙酰胆碱酯酶在固定化 后稳定性得到了较大的提高，这是由于固定化增 加了酶构象的牢固程度、挡住了不利因素对酶的侵 袭或了酶分子间的相互作用，使得酶的稳定 乙酰胆碱酯酶活性的毒理学原理，研制农产品、食 品农药残留速测卡，检测目标强，灵敏度较高，仪器 简单，时间短，前处理容易，尤其适于农产品生产基 地、配送中心和蔬菜批发等部门现场速测，是目前 实现快速检测最为稳定可行的技术选择 －２５］，目前 性有了显著的提高，酶膜的实际应用性能较游离 酶有了较大的改善。 ４．３酶促反应温度、时间、ｐＨ值 酶促反应过程中保温时间、温度、ｐＨ对酶活都 有极其显著影响，邱朝坤等Ｉ 。Ｉ通过对鲫鱼乙酰胆碱 酯酶研究发现保温温度、保温时间和ｐＨ值三个因 素对酶活影响都达到了极其显著的水平，三个因素 对酶活的影响次序依次为：时间＞ｐＨ值＞温度。鱼脑 酶活测定的最佳条件为保温时间３５ ｒａｉｎ，保温温度 ３２℃，ｐＨ ７．６。肝脏酶活测定的最佳条件为保温时间 ２８ ａｒｉｎ，保温温度３０℃，ｐＨ ７．６。肌肉酶活测定的最 佳条件为保温时间３１ ｒａｉｎ，保温温度３Ｉ￣Ｃ，ｐＨ ７．６。 ２００８年彭霞等【ｌ７Ｉ研究发现，家蚕头部乙酰胆碱酯酶 在ｐＨ ７．２～８．０范围内保持较高的酶活力，最适ｐＨ 为７．５，最适反应温度为３７ｃＩ＝。酶的活性直接影响到 用酶抑制法检测有机磷农药的可靠性和灵敏度。因 而研究酶活测定时的影响因素（包括最适ｐＨ值、 酶促反应时间及温度）从而保证酶活稳定性及灵敏 度就尤为重要。 ４．４抑制剂 生态毒理学的研究表明，有机磷农药的浓度与 乙酰胆碱酯酶活性的受抑制程度之间存在着良好 的线性关系 １，因而酶的活性直接影响到用酶抑制 法检测有机磷农药的可靠性和灵敏度。 有机磷、氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶有 强烈的抑制作用，主要是它们能够与乙酰胆碱酯酶 的活性部位快速不可逆地结合，使酶失活，从而引 起中毒，起到杀虫的作用 。 大多数有机磷农药的纯品对乙酰胆碱酯酶的 抑制能力很弱，它们必须在生理条件下激活才具 有强的抑制能力。 有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑 制具有选择性，主要是酶分子和抑制剂分子结构 的影响。大多数乙酰胆碱酯酶抑制剂６～１０ ｍｏｌ／Ｌ抑 制５～５０ ｍｉｎ，就能抑制酶的大部分活性［２２１。影响抑 制效果的化学因素包括有机磷农药上取代基的亲 电性质、大基团效应、胆碱式结构、不对称效应。取 代基不同而导致的抑制能力的改变，其比较只能 在同系物问进行１２２］。 根据此方法原理所生产的多种规格果蔬农药残留 速测仪已取得一定的应用效果。 此方法可对含农药残毒的蔬菜进行粗筛，将一 部分含农药残毒的蔬菜控制在市场外，避免农药中 毒事故发生，让人们吃上相对放心的蔬菜，是一种 野外条件下食品检验的理想方法。但是此方法只能 检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，不适用于其他农 药残毒的检测。生物传感器在测定方法多样化、提 高测量灵敏度、缩短反应时间、提高仪器自动化程 度和适应现场检测能力等方面都有很大进步。但也 存在一些问题：分析结果的稳定性、重现性和使用 寿命等方面。随着新技术、新材料的不断涌现，生物 传感器将向更加小型化、适用化方向发展。 参考文献： 【１１］ 董超，史延茂，张丽萍，等．采用植物酯酶测定农药残留的研 究 农药，２００１，４０（９）：１９—２０． ［２］纪淑娟，赵丽丽，冯辉．一种快速检测农产品有机磷农药残 留的方法【Ｊ１．农药，２０００，３９（１０）：１７—１８． 【３ ＬＩ３］ Ｆ，ＺＨＡＯ Ｊ Ｈ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉ ｎｅｓｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ｃｏｔｔｏｎ ａｐｈｉｄ ａｐｈｉｓ‘（Ｇｏｓｓｙｐｉｉ Ｇｌｏｖｅ）Ⅲ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ。２００２，５】（１）：３７—４５． 【４】刘永杰，张金振．酶抑制法快速检测农产品农药残留的研究与 应用『Ｊ１．现代农药，２００４，（４）：２５—２７． 【５］李元光，吴太虎．有机磷农药现场快速检测仪的研制【Ｊ］．医疗 卫生装备，２００１，（２）：１９—２０． ［６］温艳霞，李建科．酶抑制法在农残检测中的应用及乙酸胆碱醋 酶的研究进展［Ｊ］．食品研究与开发，２００５，２６（１）：１３０—１３３． ［７］张淑平，赵月峰，单联刚，等．用于农药残留检测的电流型酶传 感器ｆＪ］．环境化学．２００７，２７（２）：２５９—２６２． ［８］赵建庄，范志金，安健．薄层层析一酶抑制法检测有机磷和氨 基甲酸酯类杀虫剂ｆＪ１．四川师范大学学报（自然科学版）， ２００１．２４（５）：４９６—４９８． ［９］董之海，屈部华．石首鱼科鱼肌肉胆碱酯酶对有机磷化合物反 应灵敏度的研究ｌＪ１．动物学研究，１９９９，１５（１）：６５—６９． ［１０］宋燕华，吴惠杰，蔡德雷，等．用乙酰胆碱酯酶为生物标志物反 映钱塘江水环境野生鲫鱼有机磷农药暴露的研究ｆＪ１．中国卫 生检验杂志，２００９，１９（１１）：７５６２—７５６５． ［１ １】陈安珍，田金改，杜庆鹏．中药材中有机磷和氨基甲酸酯农药 （下转第７６页） ７６ 湖南农业科学 第３期 时，Ｒ 叫＝０．９４９，Ｒ＝０．９８６４＞Ｒｎ ，表明茶树绿 鳞象甲在茶树内的聚集度与种群密度之间的指数 回归关系极显著。由于ｌｏｇａ＞Ｏ，ｂ＞１时，故茶树绿 鳞象甲种群为聚集分布，此时分布具有密度依赖 方法进行测定，结果表明茶园茶树绿鳞象甲空间分 布为聚集分布，分布具有密度依赖性，其聚集度随 着种群密度的升高而增加。该茶树绿鳞象甲分布的 基本成分仍是种群，但种群个体间相互排斥。茶树 性，其聚集度随着种群密度的升高而增加。 ２．３ １ｗａｏ的ｍ＊－ｍ回归分析 结果表明，ｍ 与ｍ在茶树上回归直线方程为 绿鳞象甲的的聚集均数均大于２，说明茶树绿鳞象 甲聚集原因可能是其本身的聚集行为与环境因子 综合影响的结果，这可能与茶树绿鳞象甲喜食茶树 式（９） 的嫩叶及雌成虫产卵集中的习性有关。 ＝一１．７３７６２＋４．４９５２４ｍ（Ｒ＝０．９５３９ （９） 查“ｒ及Ｒ的显著表”可知，当ｄｆ＝６—２＝４ 参考文献： 时，Ｒ ＝０．９４９，Ｒ＝０．９５３９＞Ｒｎ们，表明茶树绿 【１】梁涛．我国生态复合茶园建设研究进展［Ｊ】＿茶业通报，２００５， 鳞象甲在茶树内平均拥挤度与平均密度之间的回 ２７（２）：６２—６３． ［２】 田永辉，梁远发，王国华，等．人工生态茶园生态效应研究［Ｊ１＿茶 归关系极显著，而且回归方程中ａ＜Ｏ，说明茶树绿 叶科学，２００１，２１（２）：１７０—１７４． 鳞象甲分布的基本成分仍是种群，但种群个体间相 ［３］姜含春，赵红鹰．绿色消费需求与无公害茶营销『Ｊ１．茶叶科学， 互排斥。／３＞１，说明茶树绿鳞象甲为聚集分布。 ２００１．２１（１）：１７—２０． ２．４聚集分布的原因 ［４】韩宝愈．茶园昆虫群落稳定性机制【Ｊ］．茶叶科学，２０００，２０（１）：１—４． 【５］杨普．皖南丘陵茶区主要害虫及天敌资源调查ＩＪ］．安徽农业 昆虫种群在空间的聚集原因，既可能是由于受 科学，２０００，２８（６）：７９１—７９３． 某些环境因素的影响，也可能是由于物种本身行为 【６ 丁岩钦．昆虫种群数学生态学原理与应用［６ｊＭＩ．北京：科学出版 特性的聚集习性所致。应用Ｂｌａｅｉｔｈ的种群聚集均 社，１９８０． 数入，检验茶树绿鳞象甲聚集的原因。由表１可知， ［７］曾伟．分葱田甜菜夜蛾空间分布型及抽样技术初步研究ｆＪ］． 样点１￣６的聚集均数均大于２，说明茶树绿鳞象甲 植保技术与推广，２００３，（８）：１ １—１２． ［８］马占山．昆虫种群空间格局研究方法的最近进展ＩＪＪ．昆虫知识， 聚集原因可能是其本身的聚集行为与环境因子综 １９９２，２９（４）：２４０－２４３． 合影响的结果。 ［９］陈向阳，丁玉洲，李增智，等．松墨天牛及其天敌花绒坚甲种群的 ３小结与讨论 三维空间分布格局［Ｊ］．应用生态学报，２００６，１７（８）：１５４７—１５５０． 运用聚集度指标法、１ｗａｏ法和Ｔａｙｌｏｒ幂法则等 （责任编辑：李睿） （上接第７３页） ｏｍｅｔｒｌｅ Ｐｍｂｅｓ ｆｏｒ Ｃｈｏｌｉｎ ｅ ａｎｄ Ｃｈｏｌｉｎｅ ＥｓｔｅｒｓＡｓｓｅｍｂｌｅｄ ｗｉｔｈ 残留的快速检测方法ｆＪ１．中国药事，２００９，２３（１１）：１０６３—１０６６． Ｎｏｎｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ［ＪＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｉｓ， 【１２］魏福祥，韩菊，刘庆洲，等．胆碱酯酶生物传感器测定有机磷 ２００１，（１３）：２３６—２４２． 农药敌敌畏【ＪＪ．河北科技大学学报，２００３，２４（４）：９２—９５． ［２１］Ｇｒｅｎｎａｎ Ｋ，￣ｌｌａｒｄ Ａ Ｊ，ＳｍｙｔｈＭ．Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｓ ｏｆ 【１３】柳娜，刘伟，黄可龙．用乙酰胆碱酯酶和硫代黄素Ｔ体系 ａ Ｓｃｒｅｅｎ－Ｐｒｉｎｔｅｄ Ｅｌｅｃｔｒ ｏｄｅ ｆｏｒＵｓｅ ｉｎ ａｎ Ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｅ Ｂｉｏｓｅｎｓ 的荧光猝灭测定有机磷农药［Ｊ］．化学通报，２００８，（４）：３０８—３１３． ｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｉｓ，２００１，ｆ１３）：７４５－７５０． 【１４］ＴＨＯＭＰＳＯＮ Ｈ Ｍ．Ｅｓｔｅｒａｓｅｓ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ［２２】王晔，彭元，赵肃清，等．乙酰胆碱酯酶膜的酶学性质及其 ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ ａｎｄ ｃａｒｂａｍａｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００５，（８）： 对有机磷农药的检测效果【Ｊ］．广西科学院学报，２００７，２３（３）： ３６９—３８４． ｌ６０—１６２． ［１５】蔡晓霞，张再隆，梁式强，等．果蔬农药残留快速检测技术研究 ［２３］ＭＯＲＧＡＮ Ｍ Ｊ，ＦＡＮＣＥＹ Ｌ Ｌ，ＫＩＣＥＮＩＵＫ Ｊ Ｗ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ 进展ｆＪＪ．产品工程技术，２００９，（１１）：１０５—１０９． ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｂｒａｉｎ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｈｎｅｓｔｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｔｌａｎｔｉｃ ａａｌｍｏｎ 【ｌ６］余孝颖．有机磷农药对不同生物来源的胆碱酯酶选择性的研 （Ｓａｌｎｏｓａｌａｒ）ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｆｅｎｉｔｒｏｎｔｈｉｏｎ【ＪＪ．Ｃａｎ Ｊ Ｆｉｓｈ Ａｑｕａｔ Ｓｅｉ， 究ｌＪ】．环境科学，１９９６，１７（４）：４１—４３． ２００６，（４７）：１６５２—１６５４． 【１７１彭霞，陶科，滕云，等，农药靶标乙酰胆碱酯酶的分离纯 ［２４】赵人诤，陈景衡，杨俊．生物酶技术与酶免技术在农残快速 化及性质研究忉．四川大学学报（自然科学版）．２００８，４５（１）： 分析方面的应用与研究进展［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００２，１２ １８９— １９４． （５）：６４０—６４１． 【１８】邱朝坤，刘晓宇，林晓娜，等．鲫鱼乙酰胆碱酯酶酶活测定条件 ［２５］Ｌｅｅ Ｈ Ｓ，Ｋｉｍ Ｙ Ａ，Ｃｈｏ Ｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏ－ 的优化研究ｆＪ］．食品科学，２００８，２９（８）：４２５—４３０． Ｉｎｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ—ｂａｓｅｄ 【ｌ９】许学勤，徐斐，华泽钊．用于有机磷农药残留快速检测的固 ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ［Ｊ１．Ｃｈｅｍｏｓｐｈｅｒｅ，２００２，４６（４）：５７１－５７６． 定化小麦酯酶研究 食品科学，２００３，２４（５）：１２２—１２６． ［２０］Ｃｕｒｕｌｌｉ Ａ，Ｄｒａｇｕｌｅｓｃｕ Ｓ，Ｃｒｅｍｉｓｉｎｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｅｎｚｙｍｅ Ａｍｐｅｒ （责任编辑：石君）
