三颥针颗粒的急性和亚慢性毒性试验报告 李超 ．房春林 ，杨海涵 （１．ｉ￣Ｊｌｌ省新兽药工程技术研究中心，四川温江６１１１３０；２．成都农业科技职业学院，四川温江６１１１３０） 中图分类号：￥８５３．７４ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１—８９６４（２０１８）０３—００２１—０３ 摘要：本试验旨在通过急性和亚慢性毒性试验来评价中药制剂“三颗针颗粒”的安全性。在急性毒性试验 中．用上下法测定三颗针颗粒的半数致死量；在亚慢性毒性试验中，测定小鼠的体重、血常规、血液生化指标 和脏器指数，并观察小鼠脏器的组织病理学变化。结果显示：三颗针颗粒的半数致死量为１４９．９ｇ生￣／ｋｇ；在 亚｜隧性毒性试验期间．各给药组小鼠在体重、血常规、血液生化指标及脏器指数方面与对照组均无显著差异， 脏器组织病理学观察也无异常。研究表明三颗针颗粒无急性毒性，临床口服给药安全。 关键词：三颗针颗粒；急性毒性试验；皿陧性毒性试验；血常规；血液生化；脏器指数 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ａｃｕｔｅ ａｎｄ Ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔ ｏｆ Ｓａｎｋｅｚｈｅｎ Ｇｒａｎｕｌｅｓ Ｌｉ Ｃｈａｏ ，Ｆａｎｇ Ｃｈｕｎｌｉｎ ，Ｙａｎｇ Ｈａｉｈａｎ’ （１．Ｓｉｃｈｕａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｎｅｗ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇｓ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｗｅｎｊｉａｎｇ ６１１１３０： ２．Ｃｈｅｎｇｄｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｗｅｎｊｉａｎｇ ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｓａｎｋｅｚｈｅｎ ｇｒａｎｕｌｅｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔｓ．Ｉｎ ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ，ｔｈｅ ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌ ｄｏｓｅ（ＬＩ）∞）ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ，ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ，ｔｈｅ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ｂｌｏｏｄ ｒｏｕｔｉｎｅ，ｂｌｏｏｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｉｎｄｅｘ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｈｅａｒｔ，ｌｉｖｅｒ， ｓｐｌｅｅｎ，ｌｕｎｇ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＬＤ∞ｏｆ ｍｉｃｅ ｗａｓ １４９．９ ｇ／ｋｇ，ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ，ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ｈａｄ ｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ｂｌｏｏｄ ｒｏｕｔｉｎｅ，ｂｌｏｏｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｉｎｄｅｘ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｓ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｓａｎｋｅｚｈｅｎ ｇｒａｎｕｌｅｓ ｈａｄ ｎｏ ａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｉｔ ｗａｓ ｓａｆｅ ｆｏｒ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓａｎｋｅｚｈｅｎ ｇｒａｎｕｌｅｓ；Ａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ；Ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ；Ｂｌｏｏｄ ｒｏｕｔｉｎｅ；Ｂｌｏｏｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ：Ｏｒｇａｎ ｉｎｄｅｘ 目前，由大肠杆菌等细菌导致的腹泻是畜禽养 殖场广泛流行的疾病，腹泻严重者甚至脱水死亡，给 收稿日期：２０１７一ｌ１—１０ 养殖户造成了较大的经济损失。为防治畜禽细菌性 腹泻，常选用喹诺酮类、氨基糖苷类、硝基呋喃类、喹 恶啉类及磺胺类等化学药物。但由于长期不规范用 药，造成临床上产生了大量的耐药菌，这给临床控制 此类疾病带来巨大的困难，人们迫切需要疗效较好、 作者简介：李超（１９８３一），女，河南人，助理研究员，研究方 向：中兽药开发与研制。 ＿Ｉｙ 兽 表１ ２０１８·０３期·总第３３１期 快速缓解症状、对肠道有较好保护作用，尤其能治疗 亚慢性毒性试验分组 耐药性细菌引起的畜禽腹泻的药物。三颗针颗粒是 纯中药制剂，其主要有效成分为小檗碱，有清热燥 湿、抗茵消炎、泻火解毒等功效。实验室前期Ｉ临床应 用发现，该中药制剂对细菌性腹泻和胃肠炎等有不 错的疗效。本试验旨在研究三颗针颗粒对小鼠的急 性、亚慢性毒性，观察该制剂的毒性作用，以对药物 食、饮水及健康状况，及时记录和分析小鼠出现的各 种变化。 的安全性做出客观评价，为其临床应用提供科学依 据。 （２）体重：饲养期间，每周称量小鼠体重，详细记 录。 １材料与方法 １．１试剂与设备谷草转氨酶（ＡＳＴ）、谷丙转氨酶 （３）血常规和血清生化指标：４２ｄ给药结束后，测 定红细胞数（ＲＢＣ）、白细胞数（ＷＢＣ）、血红蛋白量 （ＨＧＢ）、红细胞比积（ＨＣＴ）、血小板数（ＰＬＴ）、丙氨酸 转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、尿素氨（ＢＵＮ）、 总蛋白（ＴＰ）和肌酐（ＣＲＥ）。 （ＡＬＴ）、白蛋白（ＡＬＢ）、总蛋白（ＴＰ）、尿酸氨（ＢＵＮ）、 肌酐（ＣＲＥ）试剂盒，清洗液，稀释液：主要设备包括 ＢＳ—ｌ８０全自动生化分析仪、ＢＣ一２８００Ｖｅｔ兽用全自动 血液细胞分析仪。以上产品均来自深圳迈瑞生物医 疗电子股份有限公司。 （４）脏器指数：４２ｄ给药结束后，对照组和高剂量 １．２试验药物三颗针颗粒，含１ ｇ生药／ｇ颗粒，由 组分别取５只雌鼠、５只雄鼠处死，称重。剖检处死的 小鼠，取主要器官——心、肝、脾、肺、肾，称重，计算 各脏器的相对重量（脏器重／体重），即脏器指数。 （５）组织病理学：对取下来的小鼠心、肝、脾、肺、 肾进行取样、包蜡、切片，进行组织病理学观察。 四川省新兽药工程技术研究中心自制。 １＿３ 实验动物ＳＰＦ级昆明系小白鼠１２０只，雌雄 各半，体重１８—２２ｇ，由四川省医学科学院实验动物研 究所养殖研究室公司提供，实验动物许可证号为： ＳＹＸＫ（川）２０１３—１６。动物检疫驯』化时间为７ｄ，室温 ２０～２５ｃｃ，相对湿度６０％，自然光照。 （６）数据处理：所有数据均采用ＳＰＳＳ软件进行 统计学处理。 ２结果 １．４急性毒性试验根据文献报道ｌ１ｌ，采用上下法测 定三颗针颗粒的ＬＤ∞，详细记录动物毒性反应情况 ２．１ 急性毒性试验本实验条件下，三颗针颗粒对 和死亡情况，用ＡＯＴ４２５ＳｔａｔＰｇｍ软件计算半数致死 量（ＬＤ ）及其近似置信区间。 １．５亚ｌ陧性毒性试验 １．５．１剂量与分组将小鼠随机均分为４组，即三 小鼠灌胃给药的ＬＤ５ｏ为１４９．９ｇ生药／ｋｇ，９５％的近似 置信区间为８８～１７５ｇ生药／ｋｇ。给药后，小鼠的急性毒 性症状主要表现为自发活动减少、俯卧、呼吸急促，严重 的死亡，解剖和病理检查发现主要脏器无异常。 ２．２亚慢性毒性试验 颗针颗粒高、中、低剂量组和生理盐水对照组。根据 三颗针颗粒的用药原则，采用口服灌胃，按体重和分 组计算给药量并定时给药，每日１次，连续给药４２ｄ， 要及时按体重变化调整给药量。具体剂量和分组见 表１。 ２．２．１ 一般状况试验期间，药物各个剂量组和阴 性对照组的小鼠，其外观体征、行为活动、粪便性状 均正常，口、耳、眼、生殖器无异常分泌物，也未见其 他异常症状，未出现死亡。体重与对照组相比无显著 差异（Ｐ＞０．０５），结果见表２。 １．５．２检查项目 （１）一般指标：每天观察小鼠的采 表２ 亚慢性毒性试验中小鼠的体重变化 ｇ 注：同行数据比较，未肩标字母表示差异不显著（ＪＰ＞０．０５），下同 ＠ ２－２．２血常规及血液生化指标４２ｄ给药结束后，三 毒性物质等级划分，属于无毒性。 颗针颗粒各剂量组小鼠的血常规和血液生化指标与 对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）。结果见表３。 表３ ３．２亚慢性毒性试验评价某种药物的毒性，除了 进行急性毒性试验外还要进行亚慢性毒性试验。通 过该试验可获得实验动物连续多 亚慢性毒性试验中小鼠血常规和血清生化指标的变化情况 日接触较大剂量药物所出现的中 毒效应，为临床使用提供参考依 据［４１。体重和脏器指数值的升高或 降低可以不同程度地反映药物对 动物的影响，也是衡量药物毒性的 一个重要指标。在连续用药４２ｄ 后，各组小鼠的体重与对照组相 比均无显著差异（Ｐ＞０．０５），说明 三颗针颗粒对小鼠体重和脏器指 数的影响很小。 血常规检测主要是对血液中 的红细胞、白细胞及血小板这三 个系统进行量和质的检测与分 析，是最基本的血液检验，其数值 高低能反映动物在营养、感染或 组织损伤方面的情况。肝脏和肾 脏是机体重要的代谢器官，多数 药物都要经过肝脏转化然后经过 ２．２．３剖检观察和脏器指数４２ ｄ给药结束后剖检 肾脏代谢排出体外，ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＴＰ活性是反映肝功 能的重要指标［５Ｊ，肌酐和尿素氮是反映肾功能的两个 重要指标。本试验中各给药组小鼠的血常规和血液 生化指标跟对照组相比无显著性差异，各项指标和 药物剂量也没有呈现出规则变化，说明三颗针颗粒 小鼠，未发现可疑病变，三个不同剂量组的各脏器指 数与对照组相比均无显著差异（Ｐ＇Ａ３．０５）。结果见表４。 表４ 亚慢·陛毒－Ｉ生试验中小鼠的脏器指数变化 对小鼠肝、肾无损伤。 ４结论 通过急性和亚慢性毒性试验，得出三颗针颗粒 属于实际无毒级，说明该中药制剂在临床长期使用 时不会对动物产生毒性作用。■ 参考文献： 【１］张方舟，王益，颜文君，等．上下法与传统急性毒性法 ２－２．４组织病理学将三颗针颗粒高剂量组和对照 测定薄荷油ＬＤ 。的试验研究阴．河南科技大学学报（医 学版），２０１２，３０（４）：２６８—２７１． 组小鼠的心、肝、脾、肺、肾组织进行病理学切片检 查，发现各器官形态结构正常，无异常的病理学变化。 ３讨论 【２】农业部兽药审评委员会．兽药试验技术规范汇编【Ｍ】． 北京：化学工业出版社，２０１２：８４． ３．１ 急性毒性试验 急性毒性试验是指短时间内对 动物单次或多次给药，观察给药后动物产生的毒性 【３］易爱玲，邹福生，魏盈盈，等．复方金沙利胆颗粒药效 学及急性毒性研究ｌ Ｊｌ－中国临床药理学杂志，２０１５，３１ （７）：５６０—５６２． 反应及死亡情况，引起半数致死的剂量为半数致死 剂量，用ＬＤ∞表示，这是评价兽药急性毒性的常用方 法 。进行药物急性毒性试验评价的一个重要指标就 ｆ４］郭迎春，邸静，胡松华，等．人参叶口服液对大鼠的亚 慢性毒性试验ＩＪ１．动物医学进展，２０１１，３２（５）：５９—６３． （５］王贵波，王东升，谢家声，等．射干地龙颗粒对鸡的亚 慢性毒性试验［Ｊ］．湖北农业科学，２０１３，５２（４）：８７８— ８８２ 是评价半数致死量与药物毒性大小的相关，１￣Ｉ３１，本次 试验ＬＤ册为１４９．９ ｇ生药／ｋｇ，大于１５ ｇ生药／ｋｇ，根据
